第二百四十八章 不可思议
除了平板实验之外,秦霜还交给陆成的另外一个实验就是Transwell侵袭实验,侵袭实验其实和平板划痕实验的性质是差不多的。
但是两者的目的却是稍有差别。
很容易理解,平板划线法是在平板上,也就是一个平面上,细胞的迁移速率,与正常组细胞进行对比,从而得出处理组的迁移速率是快还是慢。
但是Transwell却是不一样的,因为Transwell小盒子的上层铺了一层胶质,这一层胶质可以阻挡细胞的下移,只有细胞分泌出可以溶解这一层胶质的金属蛋白酶,才能够破开胶质,然后达到营养更加丰富的下层。
这是针对肿瘤细胞侵袭能力,也是它能够分泌金属蛋白酶,穿破一定的障碍物的能力,发生侵袭的实验。
所以其实两个实验的模式是完全不一样的、
因为秦霜已经养好了细胞,所以陆成再进行后续的操作的时候,就直接省去了再要重头开始养细胞的步骤,
而两个实验中,平板划线法的实验最多只需要48h即可,但是这个实验唯一有的麻烦就是,必须在6、12、18、24和48小时的时候,记录下划痕缩小的面积,以此来算迁移比率。
是相对比较消耗时间的一种。而Transwell实验,也是需要计算下层更加丰富的营养基质中细胞的数量,来计算两组细胞侵袭能力的差异的。
如此一来,陆成除了明天晚上必须要守在实验室之外,后天的相同时间,也要来到实验室再进行一次统计,这样与他后天的手术,略有冲突。
虽然最后是有冲突的,但是陆成还是选择了在今天就完成了相应的操作。因为在细胞铺满平板之前,需要经过二十四小时的沉淀,才能够均匀的铺满,然后好进行划线的操作。
大不了,后天让一个师姐或是师哥帮他看一下就行了。
看到陆成利索地完成了相应的操作,秦霜也是放下了心来。
这看似是一种破罐子破摔的行为,但是其实也是对陆成一些基础实验的一种考验,如果陆成连平板划线的前期准备工作都做不好,那么后续的实验操作,他可能就真的需要一点一点来学的。
而且,秦霜还注意了陆成在做Transwell实验前期准备的一个细节,那就是让肿瘤细胞处于饥饿状态。
处于饥饿状态,也就是营养不足一段时间的肿瘤细胞,是更加迫切地需要大量的营养的,这样可以更加增加它的侵袭力,让实验的操作更加具有说服力。
……
而与此同时,陆成在完成了这两步的前期准备之后,也是有实验室的其他人,慢慢地给陆成布置了任务了。
就比如说费恩教授的两个博士生,凯瑟琳和查尔斯,都是把简单的细胞培养的操作,交给了陆成。
虽然讲,细胞的培养,也就是换液、分装这些最为基本的操作,但是,这是一个好的开始,陆成明白自己才来实验室第二天。
就有师兄和师姐愿意给他操作让他练习,这就是一个好的开始了,也代表了别人的认可。
有了基础的实验放手了,那么后续的实验,还会晚吗?
当天的下午,就有一个师兄主动地带着陆成完成了一次WB的相应操作,并且,还有一位做了过表达基因转录处理细胞组的师姐,还带着陆成做了RT-PCR的操作。
陆成知道这个RT-PCR的操作目的。
这是进行很多实验中都是比较重要的一环。
比如说,我们需要研究一个基因,那么一般都至少会分成以下几组。
第一组,某个基因的普通对照组,也叫阴性对照组,也就是不进行任何的处理。
第二组,则是某个基因的过表达组,使得这个基因在某一个细胞的基因序列中高表达,高表达之后,看它后续实验中,是否会出现与阴性对照组不一样的地方,来进行判别基因的功能。
同样的,为了避免它增多的阳性效果带来的误差,同时会对这个基因进行沉默或是敲除,也就是在沉默了这段基因,不让它表达功能的时候,与阴性组对比,是否会出现一系列的差异。
如此更具有说服力。
这是常规的第三分组。
第四分组,如果需要实验更加的完善的话,那么肯定还需要用一个专门的基因沉默的药物,与正常组作比较,证实它是可以通过药物来沉默的,以验证这个基因具有研究价值,甚至可能用于临床。
以上的四个分组相互比较之后,就是一组比较完善的实验组的分配了,做到这么系统的对比,说服力自然是大大加强。
但是,这一切对照组有效的前提就是,你得证明你的确是过表达了或是沉默了基因。
这个时候,就需要RT-PCR来验证基因序列的表达量了,也是用来筛选可能出现的,转染不成功,或是转染效率很小的情况。
很多的实验,很可能有人因为麻烦、费钱就会省掉这一步,但是这并不符合一个比较严谨的实验流程的。
因此,陆成也是知道了RT-PCR的相关操作流程,至少看了一遍,再结合理论的知识,下一次自己要做的时候,心里至少知道该怎么做。
而且以陆成现在几乎是过目不忘的能力,这些操作他只要看了一遍,几乎就能够完全记住,所以根本就不害怕到时候重复不出来。
……
如此一来,陆成在实验室的第一小步,就这么走了出去。
实验室里的人也是知道了陆成这个新人的存在,而且,在秦霜、凯瑟琳等人的介绍下,她们还同时给一些研究生的学弟和学妹交待,如果有什么简单的,不愿意做的,比较麻烦的操作,可以让陆成给练练手。
嘿,还真别说,因为秦霜和凯瑟琳的开口,陆成第二天就被委托了几个实验操作。
比如是让陆成测几瓶肿瘤细胞里面乳酸和葡萄糖的浓度,这些比较简单的操作。
陆成当然不会嫌弃他简单啊,因为虽然操作简单,但是量并不小。
因为知道了陆成反正要做测定乳酸和葡萄糖,于是就像实验室里的传统一样,一些需要做这两样测定的所有其他人,都是不约而同的把自己的细胞交给了陆成。
堆积下来,竟然就有四份样本需要做了。
练手的机会可是大大的有。
陆成看了一下,操作明天中午来做一下就差不多了。
……
时间缓缓而过,一下子就来到了周三。
周三的早上,陆成虽然很早就来到了实验室,但是其实他的心情并不是很好的。
因为就像之前就预料过的,周二进行手术的雷克斯,术中所见,并不是很好,几乎已经广泛的转移了,虽然目前没有发现远处转移的证据。
但是,那几乎是可以预料的事情,而且也没有任何的化疗方案对其进行补救。
也就是说,最后,等待雷克斯的,就只有三到五年的寿命,这个年轻的小伙子就会离开世界。
当时雷克斯的父母和雷克斯都没办法接受这个事实,但是,事实就是如此,这是任何人都没有办法逆转的事情,这也是当前的技术限制。
虽然他们大哭一场,但是除了自己的发泄和在陆成等人的心里留下了一丝丝的不安和不忍外,改变不了任何的事实。
即便最后雷克斯也想过要转院去其他更好的医院看看机会。
但是陆成觉得,即便雷克斯再怎么周转,恐怕最后也都无法逃离事实。
他的病理检查,已经采集了好几次,几乎已经能够确诊,而且,不是说张兴教授给他的化疗方案不行,才导致的他化疗无效,而是他本身就对这些化疗的药物不敏感。
这不是任何人的问题,也不是药物的问题,就只是上限就在那里。
虽然有些难过,但是第二天该过的日子还是得过,就像张兴教授今天仍然要继续做手术一样,就像陆成今天也要来这边看看他昨天进行的那些实验操作的最后结果。
平板划线实验,都是陆成昨天下了雷克斯的手术之后,来实验室做的。
因为当时他就看到了陆成的状态不是特别好。
的确是这样,陆成在手术室这么久时间,这个雷克斯是他第一个遇到了,只能给他进行姑息性手术,而没办法进行完整手术的人。
而且,后面的那台手术也相对比较简单,陆成就来实验室做实验了,正好调节一下心情。
陆成先是看了看昨天做的平板划线的平板,在镜子之下一看。
“欸!这两条线,就比较好看了。”陆成顿时心神大振,毕竟来这里,秦霜师姐的第一个实验就比较熟练且比较好地完成了,这对陆成产生自信心也是有帮助的。
于是陆成就喊秦霜过来看。
秦霜正在查文献,一听到陆成的话,缓缓地回头看了陆成一眼,
“你说什么?”就像是脖子是机器装的,而不是肌肉,很是生硬。
秦霜觉得自己是不是听错了。
“秦霜师姐,你要我做的那个平板划线实验,我做完了,我觉得效果还挺不错的,你要不要过来看一看?”
“我怕我看错了。”
陆成再次确定道。
秦霜立刻离开了座位,然后风风火火地闯进了细胞处置室内,接着陆成都还没从显微镜下取下来的平板就看了起来。
然后看了看标记,再看了看另一组的结果。
秦霜顿时沉默了。
两组的差距,肉眼是能够看得出来的,如果做成柱状图,必然是一张十分好看的图片,她谢过很多文章,这样的预判能力还是有的。
这种情况,与她之前做出来的很不一样,她做出来的就是差异不太明显,如果明显了,那么不管是对照组好还是实验组比较好,那都是极为有意义并且值得深究的。
但是,她做出来的没有意义,然后死马当活马医地给陆成了,陆成就真的做出来了阳性结果。
这怎么说?
“你?”秦霜略有些复杂地看了看陆成,她几乎都已经打算放弃了当前的实验方案,然后另谋他路了,现在陆成做出来这个结果。
是不是告诉她她还需要和这个实验方案硬磕个十次八次的。
万一陆成做出来的是巧合或者就是个错误的呢?
秦霜当即就道:“算了,我还是自己再来重复一遍吧。”
秦霜准备继续培养细胞的时候,才发现陆成之前把相应的细胞都用完了,所以需要她重新复苏。
秦霜于是又问:“你在做的时候,具体的操作流程是怎么样的?有操作记录吗?”
陆成自然不傻,注意到了秦霜的神态变化,赶紧道:“有的,秦霜师姐,还有其他的师姐看着我做的,操作和流程都是没问题的,我这就拿给你。”
秦霜细致的一看,陆成的操作记录,都是比较正规的,虽然说在用的试剂方面和她平时用的浓度不是特别一样。
但是,试剂的浓度差异,不应该会影响到结果的方向性才对。
秦霜心里有很多疑问,但最终还是没有问出来,只是说:“行吧,我们明天再看,然后你再好好地看那个Transwell的结果吧,如果Transwell的结果和我重复的结果,都是和你的实验结果是一致的。”
“那么,我们就可以进行下一步实验了。”
秦霜并没有提她操作失败的事情,倒不是因为她怕丑,而是怕陆成一下子就觉得自己站得很高,然后摔下去。
秦霜自然是注意到了两人操作的差异,她准备重复一次自己之前的实验操作,再重复一次陆成当前浓度的操作,这样做对比,才能够知道到底是不是试剂浓度的问题,影响了最终的实验结果。
比较,对照,永远都是实验和严谨离不开的话题。
……
再没过多长时间,陆成那Transwell小盒下层侵袭下来的肿瘤细胞的数量,也是最终定了型,在进行了染色之后,再进行了计数。
陆成再一次地把秦霜喊了过来。
陆成看着这一密一稀疏的两个实验结果,再次沉默,然后开始查文献去了。
她查的文献正是与试剂浓度与实验想过相关的最为基础的文章……
这一幕,实验室里的其他人都听到了,顿时正在细胞房里面的几个人就是面面相觑地看着陆成,眼神中都充满了不可思议之色……
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但是两者的目的却是稍有差别。
很容易理解,平板划线法是在平板上,也就是一个平面上,细胞的迁移速率,与正常组细胞进行对比,从而得出处理组的迁移速率是快还是慢。
但是Transwell却是不一样的,因为Transwell小盒子的上层铺了一层胶质,这一层胶质可以阻挡细胞的下移,只有细胞分泌出可以溶解这一层胶质的金属蛋白酶,才能够破开胶质,然后达到营养更加丰富的下层。
这是针对肿瘤细胞侵袭能力,也是它能够分泌金属蛋白酶,穿破一定的障碍物的能力,发生侵袭的实验。
所以其实两个实验的模式是完全不一样的、
因为秦霜已经养好了细胞,所以陆成再进行后续的操作的时候,就直接省去了再要重头开始养细胞的步骤,
而两个实验中,平板划线法的实验最多只需要48h即可,但是这个实验唯一有的麻烦就是,必须在6、12、18、24和48小时的时候,记录下划痕缩小的面积,以此来算迁移比率。
是相对比较消耗时间的一种。而Transwell实验,也是需要计算下层更加丰富的营养基质中细胞的数量,来计算两组细胞侵袭能力的差异的。
如此一来,陆成除了明天晚上必须要守在实验室之外,后天的相同时间,也要来到实验室再进行一次统计,这样与他后天的手术,略有冲突。
虽然最后是有冲突的,但是陆成还是选择了在今天就完成了相应的操作。因为在细胞铺满平板之前,需要经过二十四小时的沉淀,才能够均匀的铺满,然后好进行划线的操作。
大不了,后天让一个师姐或是师哥帮他看一下就行了。
看到陆成利索地完成了相应的操作,秦霜也是放下了心来。
这看似是一种破罐子破摔的行为,但是其实也是对陆成一些基础实验的一种考验,如果陆成连平板划线的前期准备工作都做不好,那么后续的实验操作,他可能就真的需要一点一点来学的。
而且,秦霜还注意了陆成在做Transwell实验前期准备的一个细节,那就是让肿瘤细胞处于饥饿状态。
处于饥饿状态,也就是营养不足一段时间的肿瘤细胞,是更加迫切地需要大量的营养的,这样可以更加增加它的侵袭力,让实验的操作更加具有说服力。
……
而与此同时,陆成在完成了这两步的前期准备之后,也是有实验室的其他人,慢慢地给陆成布置了任务了。
就比如说费恩教授的两个博士生,凯瑟琳和查尔斯,都是把简单的细胞培养的操作,交给了陆成。
虽然讲,细胞的培养,也就是换液、分装这些最为基本的操作,但是,这是一个好的开始,陆成明白自己才来实验室第二天。
就有师兄和师姐愿意给他操作让他练习,这就是一个好的开始了,也代表了别人的认可。
有了基础的实验放手了,那么后续的实验,还会晚吗?
当天的下午,就有一个师兄主动地带着陆成完成了一次WB的相应操作,并且,还有一位做了过表达基因转录处理细胞组的师姐,还带着陆成做了RT-PCR的操作。
陆成知道这个RT-PCR的操作目的。
这是进行很多实验中都是比较重要的一环。
比如说,我们需要研究一个基因,那么一般都至少会分成以下几组。
第一组,某个基因的普通对照组,也叫阴性对照组,也就是不进行任何的处理。
第二组,则是某个基因的过表达组,使得这个基因在某一个细胞的基因序列中高表达,高表达之后,看它后续实验中,是否会出现与阴性对照组不一样的地方,来进行判别基因的功能。
同样的,为了避免它增多的阳性效果带来的误差,同时会对这个基因进行沉默或是敲除,也就是在沉默了这段基因,不让它表达功能的时候,与阴性组对比,是否会出现一系列的差异。
如此更具有说服力。
这是常规的第三分组。
第四分组,如果需要实验更加的完善的话,那么肯定还需要用一个专门的基因沉默的药物,与正常组作比较,证实它是可以通过药物来沉默的,以验证这个基因具有研究价值,甚至可能用于临床。
以上的四个分组相互比较之后,就是一组比较完善的实验组的分配了,做到这么系统的对比,说服力自然是大大加强。
但是,这一切对照组有效的前提就是,你得证明你的确是过表达了或是沉默了基因。
这个时候,就需要RT-PCR来验证基因序列的表达量了,也是用来筛选可能出现的,转染不成功,或是转染效率很小的情况。
很多的实验,很可能有人因为麻烦、费钱就会省掉这一步,但是这并不符合一个比较严谨的实验流程的。
因此,陆成也是知道了RT-PCR的相关操作流程,至少看了一遍,再结合理论的知识,下一次自己要做的时候,心里至少知道该怎么做。
而且以陆成现在几乎是过目不忘的能力,这些操作他只要看了一遍,几乎就能够完全记住,所以根本就不害怕到时候重复不出来。
……
如此一来,陆成在实验室的第一小步,就这么走了出去。
实验室里的人也是知道了陆成这个新人的存在,而且,在秦霜、凯瑟琳等人的介绍下,她们还同时给一些研究生的学弟和学妹交待,如果有什么简单的,不愿意做的,比较麻烦的操作,可以让陆成给练练手。
嘿,还真别说,因为秦霜和凯瑟琳的开口,陆成第二天就被委托了几个实验操作。
比如是让陆成测几瓶肿瘤细胞里面乳酸和葡萄糖的浓度,这些比较简单的操作。
陆成当然不会嫌弃他简单啊,因为虽然操作简单,但是量并不小。
因为知道了陆成反正要做测定乳酸和葡萄糖,于是就像实验室里的传统一样,一些需要做这两样测定的所有其他人,都是不约而同的把自己的细胞交给了陆成。
堆积下来,竟然就有四份样本需要做了。
练手的机会可是大大的有。
陆成看了一下,操作明天中午来做一下就差不多了。
……
时间缓缓而过,一下子就来到了周三。
周三的早上,陆成虽然很早就来到了实验室,但是其实他的心情并不是很好的。
因为就像之前就预料过的,周二进行手术的雷克斯,术中所见,并不是很好,几乎已经广泛的转移了,虽然目前没有发现远处转移的证据。
但是,那几乎是可以预料的事情,而且也没有任何的化疗方案对其进行补救。
也就是说,最后,等待雷克斯的,就只有三到五年的寿命,这个年轻的小伙子就会离开世界。
当时雷克斯的父母和雷克斯都没办法接受这个事实,但是,事实就是如此,这是任何人都没有办法逆转的事情,这也是当前的技术限制。
虽然他们大哭一场,但是除了自己的发泄和在陆成等人的心里留下了一丝丝的不安和不忍外,改变不了任何的事实。
即便最后雷克斯也想过要转院去其他更好的医院看看机会。
但是陆成觉得,即便雷克斯再怎么周转,恐怕最后也都无法逃离事实。
他的病理检查,已经采集了好几次,几乎已经能够确诊,而且,不是说张兴教授给他的化疗方案不行,才导致的他化疗无效,而是他本身就对这些化疗的药物不敏感。
这不是任何人的问题,也不是药物的问题,就只是上限就在那里。
虽然有些难过,但是第二天该过的日子还是得过,就像张兴教授今天仍然要继续做手术一样,就像陆成今天也要来这边看看他昨天进行的那些实验操作的最后结果。
平板划线实验,都是陆成昨天下了雷克斯的手术之后,来实验室做的。
因为当时他就看到了陆成的状态不是特别好。
的确是这样,陆成在手术室这么久时间,这个雷克斯是他第一个遇到了,只能给他进行姑息性手术,而没办法进行完整手术的人。
而且,后面的那台手术也相对比较简单,陆成就来实验室做实验了,正好调节一下心情。
陆成先是看了看昨天做的平板划线的平板,在镜子之下一看。
“欸!这两条线,就比较好看了。”陆成顿时心神大振,毕竟来这里,秦霜师姐的第一个实验就比较熟练且比较好地完成了,这对陆成产生自信心也是有帮助的。
于是陆成就喊秦霜过来看。
秦霜正在查文献,一听到陆成的话,缓缓地回头看了陆成一眼,
“你说什么?”就像是脖子是机器装的,而不是肌肉,很是生硬。
秦霜觉得自己是不是听错了。
“秦霜师姐,你要我做的那个平板划线实验,我做完了,我觉得效果还挺不错的,你要不要过来看一看?”
“我怕我看错了。”
陆成再次确定道。
秦霜立刻离开了座位,然后风风火火地闯进了细胞处置室内,接着陆成都还没从显微镜下取下来的平板就看了起来。
然后看了看标记,再看了看另一组的结果。
秦霜顿时沉默了。
两组的差距,肉眼是能够看得出来的,如果做成柱状图,必然是一张十分好看的图片,她谢过很多文章,这样的预判能力还是有的。
这种情况,与她之前做出来的很不一样,她做出来的就是差异不太明显,如果明显了,那么不管是对照组好还是实验组比较好,那都是极为有意义并且值得深究的。
但是,她做出来的没有意义,然后死马当活马医地给陆成了,陆成就真的做出来了阳性结果。
这怎么说?
“你?”秦霜略有些复杂地看了看陆成,她几乎都已经打算放弃了当前的实验方案,然后另谋他路了,现在陆成做出来这个结果。
是不是告诉她她还需要和这个实验方案硬磕个十次八次的。
万一陆成做出来的是巧合或者就是个错误的呢?
秦霜当即就道:“算了,我还是自己再来重复一遍吧。”
秦霜准备继续培养细胞的时候,才发现陆成之前把相应的细胞都用完了,所以需要她重新复苏。
秦霜于是又问:“你在做的时候,具体的操作流程是怎么样的?有操作记录吗?”
陆成自然不傻,注意到了秦霜的神态变化,赶紧道:“有的,秦霜师姐,还有其他的师姐看着我做的,操作和流程都是没问题的,我这就拿给你。”
秦霜细致的一看,陆成的操作记录,都是比较正规的,虽然说在用的试剂方面和她平时用的浓度不是特别一样。
但是,试剂的浓度差异,不应该会影响到结果的方向性才对。
秦霜心里有很多疑问,但最终还是没有问出来,只是说:“行吧,我们明天再看,然后你再好好地看那个Transwell的结果吧,如果Transwell的结果和我重复的结果,都是和你的实验结果是一致的。”
“那么,我们就可以进行下一步实验了。”
秦霜并没有提她操作失败的事情,倒不是因为她怕丑,而是怕陆成一下子就觉得自己站得很高,然后摔下去。
秦霜自然是注意到了两人操作的差异,她准备重复一次自己之前的实验操作,再重复一次陆成当前浓度的操作,这样做对比,才能够知道到底是不是试剂浓度的问题,影响了最终的实验结果。
比较,对照,永远都是实验和严谨离不开的话题。
……
再没过多长时间,陆成那Transwell小盒下层侵袭下来的肿瘤细胞的数量,也是最终定了型,在进行了染色之后,再进行了计数。
陆成再一次地把秦霜喊了过来。
陆成看着这一密一稀疏的两个实验结果,再次沉默,然后开始查文献去了。
她查的文献正是与试剂浓度与实验想过相关的最为基础的文章……
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